1. C57小鼠，8-10周，通過頸(jing)椎脫位(wei)處死，浸入(ru)75%乙醇(chun)浸泡5分鐘，轉移到通風柜中(zhong)的解剖盤(pan)中(zhong)。

2. 使用眼(yan)科(ke)剪和鑷(nie)子(zi)，使髖關節脫臼，保持股骨頭完(wan)整(zheng)。

3. 用止血鉗去(qu)除(chu)每個股(gu)骨頭的軟骨帽(mao)，將(jiang)組(zu)織(zhi)放入含2%雙抗的PBS中。

4. 用冰冷的含(han)2%雙抗(kang)的(de)PBS清洗(xi)2-3遍，將關節軟(ruan)骨小(xiao)心(xin)移到2ml離(li)心管中(zhong)。

5. 用(yong)眼科(ke)剪(jian)刀將軟骨帽剪(jian)成約1mm3的碎片(pian)，加入(ru)3ml預熱(re)的(de)Collagenase D（1.5mg/ml）。

6. 放入37℃、80rpm的搖床中進行第一(yi)次消化(hua)，時(shi)間2h 。

7. 第一次消(xiao)(xiao)化結(jie)束后(hou)，加入含血清(qing)的(de)培養(yang)基終止(zhi)消(xiao)(xiao)化，40um的細(xi)胞篩(shai)過濾后，離心1500rpm，2min。

8. 沉(chen)淀(dian)用(yong)DMEM培養基(ji)重懸，計數，種植在24孔(kong)板中。

9. 在(zai)未消化(hua)的組織中(zhong)加入(ru)3ml預熱的(de)Collagenase D，放入37℃、80rpm的搖床中(zhong)進(jin)行(xing)第二次消化，時間2h，然后(hou)收集細胞。