海馬神經元原代培養細胞實驗

一、背景(jing)

神(shen)經(jing)(jing)元(yuan)(yuan)(yuan)原代培(pei)(pei)養是將胚(pei)胎哺(bu)乳動物中(zhong)樞神(shen)經(jing)(jing)系統的部分組(zu)織(zhi)，如(ru)大腦皮層、海(hai)馬、脊髓等腦組(zu)織(zhi)直接取出，再接種培(pei)(pei)養的方(fang)法。目(mu)前國內、外(wai)有關(guan)神(shen)經(jing)(jing)元(yuan)(yuan)(yuan)培(pei)(pei)養的方(fang)法較多(duo)，但(dan)在(zai)原代培(pei)(pei)養中(zhong)神(shen)經(jing)(jing)元(yuan)(yuan)(yuan)的純度(du)(du)和產量(liang)方(fang)面還存在(zai)一些急待解決的問題。由于(yu)神(shen)經(jing)(jing)元(yuan)(yuan)(yuan)是一種高度(du)(du)分化的細(xi)胞，相對于(yu)其它細(xi)胞而言，神(shen)經(jing)(jing)元(yuan)(yuan)(yuan)在(zai)體外(wai)更(geng)難以存活和生長。因(yin)此(ci)，體外(wai)培(pei)(pei)養神(shen)經(jing)(jing)元(yuan)(yuan)(yuan)要求的培(pei)(pei)養方(fang)法和營養條件均較為(wei)特殊(shu)。

神經(jing)細胞的體外培養技術是研究(jiu)神經(jing)源性疾病的發病機(ji)制、進(jin)程(cheng)的一個重要工具(ju)，能很(hen)好的、直(zhi)觀的反映離體神經(jing)元(yuan)的發育狀(zhuang)況和(he)生理活性，如何建立一個穩定成熟的神經細胞培養體系是神經系統疾病體外實驗研究順利進行的基礎。隨著基礎醫學及臨床醫學研究的逐漸深入，神經細胞的體外培養技術在腦損傷、神經障礙性疾病、衰老相關神經疾病方面得到廣泛重視和普及應用。

二、海馬神經元原代培養細胞實驗步驟

(1)75% (體積分(fen)數)酒精消毒孕鼠(shu),在無菌條件(jian)下取出胎鼠(shu),分(fen)離并去(qu)除海馬,置于冷的無鈣、鎂(mei)的HBSS液(ye)的平皿中( 下置冰(bing)袋(dai))。

(2)解剖(pou)顯微鏡無菌條件下(xia)仔細剝離海馬。

(3)用彈簧剪將(jiang)海馬(ma)剪成1cm3大小，消化液37℃消化15-20min，每五(wu)分鐘(zhong)振蕩(dang)一次；

(4)去掉上(shang)清，加入終(zhong)止液終(zhong)止消化，吹(chui)打10-15次，不能有氣泡，收集(ji)上(shang)清，剩余組織再(zai)消化一次。

(5)4℃1000rpm離心10min，棄上清(qing)，加(jia)入種植液1重懸，培養箱內差速貼壁30min；

(6)收(shou)集上(shang)清，臺盼藍(lan)染色計數，按(an)6*105cells/孔(kong)(kong)種入六孔(kong)(kong)板(ban)（種植液1），37℃，5%CO2，95%飽和(he)濕度的培養箱中(zhong)培養；

(7)培養第二天(tian)，全(quan)換液更換為種植液2；

(8)培養(yang)第四天(tian)，半量(liang)換(huan)液加入5uM的阿糖胞(bao)苷，24h全量(liang)換(huan)液；

(9)之后(hou)每(mei)周換(huan)液(ye)兩次(ci)。